KONSENTRASI, KEMURNIAN, DAN VIABILITAS SEL LEYDIG HASIL PURIFIKASI DENGAN GRADIEN NYCODENZ DAN KULTUR IN VITRO
(Concentration, Purity, and Viability of Leydig Cells after Purification Using Nycodenz Gradienz and In Vitro Culture)
Ekayanti M. Kaiin, Ita Djuwita, Tuty L. Yusuf, M. Agus Setiadi
ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan isolasi dan purifikasi sel Leydig dengan menggunakan gradien Nycodenz untuk meningkatkan jumlah perolehan sel Leydig yang hidup setelah purifikasi dan kultur. Isolasi dan purifikasi sel Leydig dilakukan dengan perlakuan gradien Nycodenz 3 kolom (5, 10, dan 15% sebagai Nycodenz I) dan 5 kolom (4, 8, 10, 12, dan 15% sebagai Nycodenz II) serta gradien Percoll 5 kolom (21, 26, 34, 40 dan 60%) sebagai kontrol. Parameter yang diamati adalah konsentrasi, kemurnian, dan viabilitas sel Leydig setelah isolasi dan purifikasi serta kultur in vitro. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa isolasi dan purifikasi sel Leydig dengan gradien Nycodenz (I dan II) secara nyata (P<0,01) menghasilkan konsentrasi sel yang lebih rendah dibandingkan dengan gradien Percoll. Namun penggunaan gradien Nycodenz II cenderung menghasilkan kemurnian sel yang lebih tinggi (91,40%) dibandingkan dengan Nycodenz I (85,53%). Hasil tersebut tidak berbeda nyata dibandingkan dengan gradien Percoll (92,20%). Viabilitas sel Leydig pada semua perlakuan hampir sama yaitu 98%. Namun demikian, setelah dikultur selama 3 hari, konsentrasi sel Leydig pada perlakuan Percoll (2,44x106 sel/ml) dan Nycodenz I (3,21x106 sel/ml) secara statistik (P<0,05) lebih rendah dan dibandingkan dengan Nycodenz II (3,88x106 sel/ml), sedangkan viabilitas sel Leydig setelah dikultur pada gradien Nycodenz I (90,00%) dan Nycodenz II (91,17%) secara sangat nyata (P<0,01) menghasilkan viabilitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan gradien Percoll (82,30%). Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa penggunaan gradien Nycodenz II efektif untuk mempurifikasi sel Leydig dan setelah dikultur menghasilkan konsentrasi dan viabilitas sel yang lebih tinggi dibandingkan dengan gradien Percoll.
Kata kunci: sel Leydig, kolom, Nycodenz, Percoll, kemurnian, viabilitas
ABSTRACT
This research aim to find out the isolation and purification of Leydig cells using a Nycodenz gradient to increase cell viability after purification and cultured. Isolation and purification of Leydig cells were carried out using Nycodenz gradient with 3 columns (5, 10, 15% as Nycodenz I), and 5 column (4, 8, 10, 12, 15% as Nycodenz II) and Percoll gradient as control. The concentration, purity and viability of Leydig cells were evaluated after isolation and purification and in vitro cultured. The results showed that the isolation and purification of Leydig cells using Nycodenz gradient (I and II) yielded significantly (P<0,01) in lower concentrations compared to a Percoll gradient. Isolation and purification of Leydig cells using Nycodenz gradient II tends to produce higher purity (91.40%) compared to Nycodenz I (85.53%). However, this results were not significantly different compared to the Percoll gradient (92.22%). Leydig cells viability were 98% similar in all treatments. However, after 3 days cultured Leydig cells yielded significantly (P<0.05) in lower concentration in Percoll (2.44x106 sel/ml) and Nycodenz I (3.21x106 sel/ml) compared to Nycodenz II (3.88×106 sel/ml), and Leydig cells viability were significantly (P<0,01) higher at Nycodenz I (90.00%) and Nycodenz II (91.70%) than Percoll (82.30%). Based on these results it can be concluded that Nycodenz II gradient is effective to purify Leydig cells, and after cultured for 3 days, the Leydig cell concentration and viability were significantly higher in Nycodenz II than Percoll gradient.
Key words: Leydig cells, column, Nycodenz, Percoll, purity, viability
Publish in Jurnal Kedokteran Hewan Vol. 7 No. 1, Maret 2013 p 75-80